CVSF: Trasplante de células madre mesenquimales como terapia, en las patologías, de la articulación de la cadera en el perro.

Trasplante de células madre mesenquimales como terapia, en las patologías de la articulación de la cadera en el perro.

Resumen:
La terapia con células madre en las patologías de la articulación de la cadera en el perro, mejora el dolor articular, la funcionalidad, movimientos necesarios en la vida de relación del animal, y repara y restituye el cartílago dañado. Se forma un nuevo tejido cartilaginoso. Se forma cartílago.

Abstract:
The therapy with stem cells in the pathologies of the hip joint in the dog improves joint pain, functionality, necessary movements in the life of the animal's relationship and repairs and restores damaged cartilage. A new cartilaginous tissue is formed. It develops cartilage.

En este trabajo pretendemos demostrar la eficacia terapéutica del trasplante de células madre mesenquimales (CMM) en las patologías articulares de la cadera en el perro.

Estudiaremos caderas en las que ha trascurrido más de un año después del trasplante de CMM.
En estos casi diez años aplicando esta terapia, hemos podido comprobar que es a partir de los seis meses del trasplante cuando empezamos a apreciar y poder valorar los efectos de dicho trasplante.

Células Madre:
El tratamiento con células madre constituye una revolución en la terapéutica de este siglo, ofrece tratamientos poco invasivos y eficientes ofreciendo soluciones aún no resueltas con la medicina convencional.

Las células madre constituyen el origen de todos los órganos y cada uno de los tejidos del cuerpo. Hay muchos tipos diferentes de células madre que provienen de diferentes lugares en el cuerpo o se forman en diferentes momentos de nuestra vida. Las células madre en las primeras etapas del embrión definen la identidad de cada uno de los tejidos que se han de desarrollar. Parte de las células madre que aparecen y se mantienen en el desarrollo fetal permanecen activas en el individuo adulto a lo largo de toda su vida. Las células madre se definen y se diferencian del resto de células por su capacidad de “auto-renovación”, es decir, que pueden hacer copias exactas de sí mismas y a su vez pueden “diferenciarse” y convertirse en células especializadas y poder recuperar o renovar la función del tejido perdida ya sea por lesiones, defectos o determinadas enfermedades. Cuando una de estas células da lugar a una célula especializada, y se produce este proceso llamado diferenciación, la célula pasa por diferentes etapas hasta convertirse finalmente en un tipo de célula concreto.

El objetivo de la medicina regenerativa e ingeniería tisular es el de restablecer la anatomía y función de un órgano o tejido tras una lesión y el uso de células madre o troncales se presenta como una herramienta revolucionaria y prometedora en estos campos. En este contexto, la terapia celular implica la obtención y aislamiento de células somáticas o células madre adultas (exentas de los conflictos éticos que conlleva el uso de células madre embrionarias), la expansión de dichas células, el posible tratamiento de éstas, la diferenciación a nuevos tipos celulares y, finalmente, el trasplante de la población celular.

Las células madre mesenquimales (MSCs) son células no hematopoyéticas multipotenciales que tienen capacidad de diferenciarse y regenerar tejidos de origen mesodérmico como hueso, tendón, ligamento, grasa, cartílago o músculo, así como capacidad de autorrenovación, de promover la angiogénesis y regular la respuesta inflamatoria. Se identificaron y aislaron por primera vez de médula ósea (BM-MSCs) y actualmente se han hallado MSCs en otros tejidos como periostio, membrana sinovial, músculo esquelético, piel, grasa, cordón umbilical o hueso trabecular]. De acuerdo con la Sociedad Internacional de Terapia Celular, las células mesenquimales han de cumplir tres requisitos para ser consideradas como tal: i) capacidad de adherencia al plástico en condiciones estándar de cultivo ii) expresión positiva de los marcadores de superficie CD105, CD73 y CD90 y no expresión de CD45, CD34, CD14 o CD11b, CD79alpha o CD19 y HLA-DR y iii) capacidad de diferenciación a osteocitos, adipocitos y condrocitos.

En diversos ensayos clínicos las MSCs han mostrado potencial terapéutico en el tratamiento de enfermedades como la enfermedad coronaria aguda, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad injerto contra huésped en trasplantes, osteogénesis imperfecta, diabetes mellitus y enfermedad de Crohn, entre otras, y una reducción del daño tras lesiones en el corazón, pulmón, hígado, riñón, médula, cerebro o piel y en lesiones osteoartriticas. Además, se sabe que las MSCs secretan moléculas como citocinas, quimiocinas, y factores de crecimiento que median diversas funciones mediante interacción con otros tipos celulares. Éstas desempeñan un importante papel en la regeneración de los tejidos de forma local o directa desencadenando mecanismos intracelulares en las células dañadas o indirectamente induciendo la secreción de mediadores funcionalmente activos por parte de células vecinas Células mesenquimales derivadas de tejido adiposo (ASCs).

Durante años, las células mesenquimales derivadas de la médula ósea (BM-MSCs) han sido la principal fuente de células en regeneración tisular a pesar de que el proceso de obtención de estas células es laborioso, doloroso, la cantidad de tejido muy limitada y el número de MSCs obtenido muy bajo (requiere de técnicas de expansión). Las células mesenquimales derivadas de tejido adiposo (ASCs) son de fácil obtención mediante métodos poco invasivos para el paciente, el rendimiento de obtención de ASCs a partir de grasa es alto (5x103 células/g tejido adiposo vs 102-103 células/mL de aspirado de médula [13]), su técnica de cultivo y expansión es simple y presentan una gran plasticidad. Al igual que las BM-MSCs, son capaces de diferenciarse a diversos tipos celulares de origen mesodérmico como condrocitos, adipocitos y osteocitos, pero cada vez existe una mayor evidencia científica de que estas células pueden diferenciarse a células de origen distinto, como neuronas, células pancreáticas endocrinas, hepatocitos, células endoteliales, cardiomiocitos y células epiteliales mediante un proceso que se ha denominado diferenciación cruzada. Las ASCs promueven la regeneración de los tejidos secretando citocinas y factores de crecimiento que estimulan la recuperación de los tejidos o la reducción del daño, además, presentan propiedades inmunomoduladoras que se han relacionado con este secretoma y los factores tróficos presentes en él (factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), factor estimulante de colonias de granulocitos y monocitos, interleucinas 6, 7, 8 y 11, factor de necrosis tumoral α (TNF- α), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor neutrófico derivado del cerebro (BDNF) factor de crecimiento nervioso (NGF) y adipocitocinas) y existe evidencia de que estas moléculas tienen numerosos efectos positivos en el sistema nervioso central, el sistema inmunitario, corazón, músculos e incluso en la viabilidad celular.

De acuerdo con la base de datos de ensayos clínicos, son más de 180 los ensayos clínicos registrados en los que se emplean ASCs y el número es creciente cada año. En éstos se evalúa el potencial terapéutico de las ASCs en enfermedades como osteoartritis, diabetes, cirrosis, fístulas, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de Crohn, esclerosis lateral amiotrófica y ateroesclerosis, entre otras.

Dependiendo del objetivo, se han desarrollado diversas estrategias de administración de las ASCs como son la aplicación tópica directa, inyección sistémica, inyección subcutánea o el uso de andamios o matrices (“scaffolds”) que sirvan de nicho para las células. No obstante, la ausencia de un asentamiento o injerto estable en el tiempo en el tejido dañado continúa siendo un factor limitante en terapia celular. De hecho, en modelos de lesión de páncreas, corazón, riñón e hígado en los que se administraron sistémicamente MSCs se reportó menos de un 3% de tasa de injerto a largo plazo. Los andamios de polímeros juegan un importante papel en ingeniería tisular dirigiendo procesos celulares en función de sus propiedades bioquímicas y estructurales. Los materiales empleados determinan propiedades físicas como la biocompatibilidad, la biodegradación y la estabilidad mecánica del scaffold polimérico. La superficie del andamio es un substrato para la adhesión y migración celular lo cual indirectamente puede influir en la supervivencia y capacidad de invasión de las células. Las superficies pueden ser diseñadas para presentar secuencias celulares específicas para que éstas se adhieran con una determinada densidad, pueden ser funcionalizadas con factores de crecimiento o secuencias de DNA e incluso se pueden introducir patrones geométricos que influyan en la orientación celular, alteren la expresión de ciertos genes, regulen la estructura del tejido resultante o afecten a las propiedades mecánicas de éste. Se ha reportado que el desarrollo y uso de scaffolds a partir de materiales naturales como el ácido hialurónico y el colágeno puede aumentar la formación de tejido. El ácido hialurónico (HA) es un glicosaminoglicano co-polímérico del ácido D-glucurónico y la N-acetil-D-glucosamina y es el componente principal de la matriz extracelular y del tejido conectivo. Es por ello biocompatible, biodegradable y desempeña un importante papel en funciones biológicas como la estabilización y organización de la matriz extracelular, regulación de la adhesión, y mediación de procesos de proliferación y diferenciación celular. Las interacciones entre las células y él HA ocurren a través de receptores de superficie (CD44, RHAMM, ICAM-l) e influencian procesos como la morfogénesis, inflamación, cicatrización y metástasis. No obstante, el HA posee propiedades mecánicas pobres y una rápida degradación y aclaramiento que limitan su potencial terapéutico. Para solventarlo, éste puede ser modificado químicamente para formar hidrogeles. Los hidrogeles son redes entrelazadas poliméricas e hidrófilas que son capaces de absorber hasta 1000 veces su peso en agua, lo que les proporciona propiedades físicas similares a las de los tejidos blandos; además, su rigidez, porosidad y elasticidad puede ser fácilmente variada o controlada. Son altamente permeables, lo que facilita el intercambio de oxígeno, nutrientes y otros metabolitos hidrosolubles. Incluso es posible la introducción de sitios de adhesión celular en estos hidrogeles (empleando péptidos de unión a integrinas (RGD) o recubriendo los hidrogeles con proteínas de adhesión celular como colágeno, laminina o fibronectina).(1)

Displasias en sus diferentes categorías, con la típica patología que presenta la displasia de cadera en animales jóvenes principalmente, siempre es bilateral.

En Osteo Artrosis (OA) en procesos degenerativos en la articulación de la cadera, con artrosis, dolor perdida de cartílago con defectos condrales graves y perdida de funcionalidad. Patología que generalmente encontramos en animales a partir de una cierta edad. Suele ser bilateral.

Necrosis idiopática de la cabeza femoral. O necrosis de la cabeza femoral. Patología que se da generalmente, en animales en los que se ha producido una luxación traumática de la cabeza femoral (en estos traumatismos de alto impacto y de gran energía, se produce un estrés en la estructura arquitectónica de la cabeza femoral, pudiéndose producir una a vascularización y/o necrosis de la cabeza femoral). En los casos de la enfermedad de Legg Perthes Calve. Generalmente en razas pequeñas, pero que puede darse en razas de talla grande. Y en las roturas sin luxación del Ligamento Redondo, patología que es más frecuente de lo que se intuye, y que degenera la cabeza femoral, por perdida de vascularización.

Podríamos hablar de rodilla de codo hombro tarso carpo, pero nos centraremos en la cadera, que es la patología en la que hemos trabajado más. Y que estadísticamente es la de mayor incidencia.

Hemos de valorar diferentes parámetros para entender los beneficios de esta terapia.

- Dolor, en la mayoría de los casos el animal tiene dolor, y presenta molestias que serán más o menos incapacitantes dependiendo de la gravedad de la lesión, de la raza, y de la capacidad de cada animal para gestionar su dolencia.

- Funcionalidad, la perdida de funcionalidad , movimiento traslado , perdida de rango en los movimientos principales de la cadera, flexión, extensión abducción abducción, perdida de la masa muscular, y perdida en capacidades de la convivencia, paseos subir bajar escaleras, poder subir al automóvil, cambios de carácter (dolor), perdida en la interacción mascota propietario.

- Radiología, en los estudios radiológicos de estas patologías, valoramos principalmente, la perdida de interlinea articular, perdida de congruencia articular (parámetro fundamental, para que el movimiento articular sea correcto). La aparición de irregularidades en las líneas de fricción o deslizamiento, perdida de cartílago y aparición de defectos condrales.

El planteamiento que hemos establecido en el trasplante de CMM en la articulación de la cadera, se ha basado en el siguiente protocolo.

En animales con una talla media y peso superior a 15 kilos, se ha actuado de la siguiente manera:

a- Limpieza articular vía artroscópica. Sinevectomia, fresado y legrado con motor de los defectos condrales. Acetabulectomia en los casos en los que era preceptivo para adecuar la articulación.

b- Aspirado forzado para arrastrar los detritus y microosteofitos que invaden la articulación. Lavado con povidona yodada.

c- Forage, si se considera necesario(técnica del FORAGE, que consiste en perforar la cabeza de fémur desde el trocánter mayor atravesando el cuello femoral y la cabeza femoral, esta acción produce millares de micro fracturas que por neo vascularización reparadora vascularizan de nuevo la cabeza femoral. Principalmente el Legg Pethes Calve Necrosis. Y en displasias de animales jóvenes con riesgo vascular).

d- Aplicación de ácido hialuronico (AH) y factores de crecimiento (PRP), preparación de la articulación para el trasplante de las CMM. El AH se expande por toda la articulación, su capacidad visco elástica hace que cualquier rincón o superficie de la articulación se vea recubierta, también tiene una capacidad analgésica, antiinflamatoria. Los PRP también potencian la acción analgésica antiinflamatoria del AH pero además inician el proceso de reparación.

e- Entre dos o tres semanas de la preparación de las articulaciones realizamos el trasplante de las CMM, siguiendo el siguiente protocolo: preparamos la zona a trasplantar con la máxima asepsia de la superficie depilada y rasurada. Realizamos una artrocentesis a fin de retirar si existe exceso de sinovia o derrame articular. A continuación se inyecta primero AH, después e inmediatamente PRP, y por último y a continuación se trasplantan las CMM. Durante unos minutos se moviliza la articulación, y se aplica hielo en la zona de artrocentesis.

En perros pequeños, en los que no es posible la intervención artroscópica, solo en los casos explícitamente necesario, nos planteamos la artrotomia. En la mayoría de ellos e trasplantan las CMM siguiendo el mismo protocolo, pero sin la intervención quirúrgica.

El seguimiento del trasplante lo establecemos de la siguiente manera:
- a los 90 días tres meses del trasplante,
- a los 180 días seis meses del trasplante
- a los 270 días nueve meses del trasplante solo en animales muy jóvenes (el proceso es más rápido), y en animales con patologías muy complejas por el deterioro articular)
- a los 365 días un año del trasplante
- revisión cada año posterior.

1- Funcionalidad del animal.
Movimientos normales de convivencia.
Rango de movimientos articulares medición de los mismos (goniometría) flexión extensión abducción adducción.
Subir bajar escaleras.
Ponerse a dos patas.
Subir y bajar del automóvil.
SENSACION DE DOLOR.
DOLOR A LA MANIPULACION.
Ganas de jugar con otros perros.
Interacción con el propietario, quiere salir a pasear prolonga el paseo.
Masa muscular.
CARÁCTER más sociable, se deja acariciar no tiene miedo cuando se le acercan personas y/o animales.

2- Estudio radiológico.
Valoramos la congruencia articular.
Valoramos la interlinea articular.
Las líneas de fricción, rugosidades lesiones condrales turbidez articular.
Cambios en la estructura articular, reestructuración articular, reparación.
Arquitectura articular, cambios en el abovedado del acetábulo, en la constricción de la cabeza femoral dentro del acetábulo.

3- Expectativas del trasplante.
- Expectativas generadas por el propietario del animal. En general, las expectativas del propietario en todos los casos ha sido positivas. En el momento en que el animal no tiene dolor, y esto ocurre dentro del primer mes y medio del trasplante, el propietario, ya ve cubiertas sus expectativas.
A medida que avanzamos en el tiempo, la recuperación de fuerza al moverse, el aumento de funcionalidad correr saltar subir bajar etc., el propietario se siente totalmente satisfecho, y ha superado sus expectativas.

- Nuestras expectativas siempre están por debajo de las del propietario, nosotros al valorar al animal, valoramos la funcionalidad, valoramos la imagen radiológica, y valoramos el conjunto ergonómico de la función.

Basándose en los parámetros expuestos, valoraremos las estadísticas recopiladas hasta el 31 de mayo del 2018, de los casos trasplantados con CMM en procesos patológicos de la cadera en el perro con seguimientos a más de un año.

De los 38 casos tratados con seguimiento a más de un año, 35 son bilaterales, y 3 unilateral, en total estaríamos hablando de 73 articulaciones, ya que en los casos bilaterales, cada articulación es diferente, y reacciona de forma pareja pero distinta.

22 caderas con displasia 44 articulaciones. 12 casos con OA 22 articulaciones otros casos de rotura del ligamento redondo, luxación traumática.
Hablamos de unas cifras bastante significativas para tener en cuenta la terapia que presentamos.
Hemos trabajado con diferentes razas y diferentes edades. No hemos tenido en cuenta dichos parámetros al poner en estadísticas los resultados, nos hemos basado principalmente en la observación y valoración de cada animal en las diferentes revisiones.

La displasia de cadera con un 69% ocupa la mayoría de casos tratados, la OA ocupa la segunda posición con el 22%, los problemas que se devienen por patologías que se han presentado después de una luxación traumática de la cabeza de fémur ocupa el 3%, y es importante tener en cuenta el 6% que representa las patologías producidas por la rotura sin luxación del ligamento redondo.

DOLOR, el dolor es quizás el parámetro más importante para conseguir una recuperación funcional y de relación.

El propietario es lo que valora en primera instancia. Percibe perfectamente en el momento en que su animal deja de tener dolor. Cambia radicalmente su carácter deja de tener miedo, participa en el juego con personas y animales, quiere salir a la calle se mueve y actúa.

La manipulación de la articulación es muy importante, realizar los movimientos de flexion-extension-adduccion-abduccion, valorar estos movimientos y medir gonio métricamente para ver si cada movimiento está dentro de los rangos correctos.

Movimiento, valoraremos los movimientos normales para la relación del animal correr girar subir y bajar escaleras, subir y bajar del coche. juegos con pelota , juegos con otros perros.
Funcionalidad, todos los movimientos necesarios para el movimiento incluye a todos los anteriores.

El grado de satisfacción del propietario, suele ser una sensación que se produce prácticamente a los pocos meses del trasplante, ya que en el momento en que desaparece el dolor, el animal comienza a funcionar perfectamente, y se constata le grado de satisfacción del propietario y se ven realizadas sus expectativas.
Nuestras expectativas o grado de satisfacción, difiere bastante de las expectativas del propietario, ya que nosotros valoramos minuciosamente cada uno de los parámetros a medir. Todo y con ello a medida que va pasando el tiempo a más tiempo mejor recuperación y mejor satisfacción.
Una vez conocemos cual es el método que seguimos para evaluar el resultado en la articulación tratada con la terapia mediante el trasplante de CMM.
Pasaremos a comentar tres casos que por motivos diferentes se han sacrificado después del trasplante de CMM
En todos los casos se ha pedido autorización al propietario para manipular y estudiar las muestras anatómicas extraídas del paciente sacrificado.

El primer caso estudiado. Cadera Pastor Alemán macho entero, nacido el 25-12-2008 peso 32 kilos OK.

19-01-2015: Diagnosticado de proceso degenerativo en cabezas femorales, presumiblemente a consecuencia de una displasia de cadera. Le han diagnosticado una hernia discal entre la L2-L3.

Historia del animal.
No ha levantado nunca la pata para miccionar.
Entrecruza las patas al dar la vuelta
No ha presentado nunca síntomas neurológicos.

Exploración
Radiología
Buena congruencia articular
Línea interarticular definida
La medición de los ángulos de Norberg están sobre los 105º no hay displasia
Sí que se aprecia un agrandamiento de las cabezas femorales
Cierta degeneración en zonas determinadas del cartílago
E imágenes de esclerosis ósea.

La degeneración de las cabezas femorales, posiblemente son consecuencia de la forma del animal, grupa extraordinariamente caída
En columna no apreciamos lesiones, intuimos una espondilosis en futuro.

Recomendamos un ejercicio continuo no forzando al animal, y no se descarta la aplicación de un trasplante de células madre si la articulación sigue degenerando. Se descarta totalmente la prótesis de cadera.

26-02-2015: Presenta un deterioro importante en la cadera, más en derecha que en izquierda
Radiología.

Articulaciones colapsadas
Perdida de línea interarticular
Osteoartrosis definida
Osteofitosis.
Cruza las patas al andar
Recuesta levantarse
No quiere jugar
No quiere salir a pasear.

En las imágenes radiológicas podemos valorar el grado de osteoartrosis que se ha generado.
Proponemos limpieza articular vía artroscópica, forage y trasplante de células madre.

Articulación colapsada.
Sinovitis.
Defectos condrales.
Derecha necrosis en zonas determinadas apicales de la cabeza.
Sinevectomia.
Legrado de los defectos condrales.
Forage.

Sinovitis hemorrágica. Defectos condrales muy manifiestos. Osteofitos, pérdida de cartílago.
Aplicación de ácido hialurónico+factores de crecimiento.

19-03-2015: Está mejor que antes de operar, tiene mejor funcionalidad
25-03-2015: Trasplante células madre DIA 0.

No hay colapso articular
Mejor congruencia
Línea interarticular se empieza a definir
Buena funcionalidad
Se deja manipular
Solo hay dolor en los movimientos forzados.

20-05-2015: El animal se queja ha empezado a tener síntomas neurológicos al andar arrastra las patas en la exploración perdida de reflejos propiocepción y dolor en la zona lumbar.

Radiología presenta una degeneración de las vértebras lumbares L5-L6-L7-S1 cauda muy marcada
Tratamiento prednisona gabapentina y analgésicos.
Ha perdido mucha masa muscular.

Ha mejorado de los síntomas de la cauda con el tratamiento que sigue tomándolo
De la cadera esta mejor, tiene más fuerza está más animado, en cuanto desaparece el dolor de columna está más activo.

Muy buena congruencia articular
Se está definiendo la interlinea articular
Hay movimiento de reparación-regeneración aun no muy manifiesto
No podemos valorar la función, ya que se solapa con los problemas de columna
El estado general del animal está deprimido come poco y esta triste.

Mandamos realizar una resonancia nuclear magnética.
Resultado: pérdida total de masa muscular cauda sin una compresión incapacitante, pero sí que se ven alteraciones a nivel medula espinal.

En tres días ha perdido la función en tercio anterior y posterior, hundimiento de los huesos del cráneo, por pérdida total de musculatura (miositis). El animal no come ha dejado de defecar y orinar, esta sin moverse. No reacciona a ninguna medicación.

Viendo la situación, de común acuerdo con los propietarios decidimos eutanasiar al animal.
Con el permiso de los propietarios procedemos a la necropsia.

Han transcurrido 100 días desde la aplicación de las células madre y el fallecimiento del animal.

Que valoraremos:
Perro de siete años.
Proceso degenerativo Osteoartrosis.
Trabajo importante en el momento de la artroscopia, para poder dejar la articulación en orden. Motor y aspirado forage.
Musculatura poco desarrollada.
Hándicap de lesión en columna.
Tiempo de proceso de trasplante.
Sabemos que los tres primeros meses después del trasplante, clínicamente y radiológicamente no apreciamos cambios significativos. Excepto en animales muy jóvenes cachorros de menos de un año.

En este caso, la radiología nos muestra:
Los defectos condrales están muy marcados.
Hay una mejora en la congruencia articular.
Todavía no tenemos definida la línea interarticular.
En la necropsia, obtenemos las dos cabezas de fémur y los dos acetábulos.

Radiografiamos las muestras desde diferentes posiciones, y observamos como la congruencia articular está mejor que el DIA 0, pero el aspecto de la articulación es de Osteoartrosis degenerativa.
Sin embargo, la observación macroscópica de las muestras anatómicas, nos dan una imagen de un intento de regeneración, encontrando muchas zonas donde se ha formado ya un tejido nuevo que está recubriendo la cabeza femoral, facilitando el deslizamiento de la misma dentro del acetábulo, igual forma apreciamos en el acetábulo.

Microscópicamente se aprecian, la aparición de zonas de regeneración, que es lo que apreciamos macroscópicamente. Aparecen cantidades de condrocitos proporcionales a la regeneración. Estos condrocitos no siguen ningún orden están totalmente dispersos.
También se aprecia restructuración osteocondral, con focos donde se ven trabéculas Oseas con presencia de medula ósea.(2)

En definitiva tenemos ya a los 100 días, un proceso bioregenerativo, y lo más importante hay condrocitos. Si hay condrocitos hay cartílago.

1-4: X100 (Hematoxilina Eosina). Focos de diferentes tamaños y dimensiones "intraregenerativos" donde se aprecian áreas más o menos activas-extensas (en función de la cantidad de condrocitos presentes) de osificación endocondral asociada con cada foco.

5: X100 (Hematoxilina Eosina). Imagen de uno de los focos donde se aprecian trabéculas óseas completamente típicas con presencia de médula ósea funcional.

Podemos concluir el estudio del caso, viendo que desde el primer momento las células madres son invasoras de las zonas con defectos condrales y pérdida de cartílago.
Desde el primer momento se diferencian y empiezan a trabajar desde las diferentes necesidades, y ofreciéndose como sustitutorias de los diferentes tejidos y/o estructuras que la articulación tiene lesionados.

Las hipótesis que nos habíamos formulado se van cumpliendo. Regeneración por sustitución y neo formación de lo que está mal o no esta.
Solo 100 días del trasplante.

Segundo caso estudiado. Cadera, perro braco nacido el 25-12-2000, macho entero, presenta una artrosis de cadera bilateral. Perro que ha hecho mucho ejercicio cazador.

10-12-2010: Se presenta con un proceso de dolor en ambas caderas, articulación inflamada.

En la artrocentesis sacamos 2ml de líquido sinovial de la derecha y 5 ml de líquido sinovial de la izquierda, el aspecto del líquido sinovial es sanguinolento, turbio, y la citología nos da células hematinas y macrófagos. Componente inflamatorio.

La imagen radiológica, a pesar de la osteoartrosis de las articulaciones, hay muy buena congruencia articular, y buena fricción.

Le proponemos hacer una limpieza articular, forage y factores de crecimiento.
Aplicamos una tanda de factores 23-12-2010//30-12-2010.

10-01-2011: Artroscopia limpieza articular, forage y aplicación de factores de crecimiento.

Sinovitis muy hemorrágica. Defectos condrales con perdida importante de cartílago y articulación muy colapsada.

30-03-2011: Dolor a los movimientos de abducción y adduccion bilateral, extensión y flexión forzada., se le propone tratamiento compasivo, aplicando células madre mesenquimales homologas (este animal esta referenciado en la tesis Doctoral de la Dra. Belén Cuervo).

17-05-2011: Artroscopia limpieza articular, aplicamos aspiración forzada, motor, afeitado de toda la sinovitis, y preparamos el lecho para la aplicación de las células madre
Se extrae la sangre y la grasa para su procesamiento.

Artrocentesis previa a la aplicación de células, 15 ml de sinovia en derecha 5 ml en izquierda. Sinovia limpia en la citología poca celularidad.

Radiografía:
Buena congruencia.
Articulación colapsada, sinovitis.
Buena movilidad.
En este periodo de tiempo se le ha estado aplicando factores de crecimiento, y ha salido a cazar dos veces por semana.
Trasplante factores de crecimiento y células madre.

Radiológicamente sin cambios.
Funcionalidad mejor según el propietario, no ha dejado de ir a cazar, caca día anda un mínimo de dos horas.
Articulación desinflamada, no hay liquido sinovial en exceso.
El propietario está muy contento ya que el animal no se queja.

Radiológicamente:
Se aprecia un proceso lento pero continuo de remodelación.
Muy buena congruencia.
Interlinea articular muy bien definida.
La funcionalidad es muy buena.
Las mediciones goniométricas de los rangos articulares, están normales.

El perro está muy activo.
Están cazando, no han cambiado su rutina. El ir a cazar es trabajar seis siete horas dos veces por semana.
El propietario está muy contento.

Radiología:
Está muy bien estructurada la articulación.
Congruencia articular muy buena.
Interlinea articular definida.
Rotación y deslizamiento correctos.
La articulación tiene un aspecto funcional al 100%.

La funcionalidad es total.
Corre sube baja y sigue cazando dos veces por semana.
El perro tiene ganas de salir al campo.
Quiere correr.
No se cansa, está activo.

Durante este tiempo a partir de la revisión de los seis meses, ha tenido problemas con la columna lumbar. Hernia discal en la L5-L6 y entre la L7-S1, estos problemas de columna, han respondido muy bien a la mediación.

18-06-2012: Le cuesta orinar, micción entrecortada, ecografía, aparece una masa inmensa en abdomen caudal. Biopsia por punción, adenoma prostático. El tumor tiene el tamaño de un melón, no se descarta metástasis en órganos colindantes.

Se consensua sacrificar al perro. (El propietario no quiere someter al animal a quimioterapia ni más pruebas, está muy afectado).
Con el consentimiento del propietario realizamos la necropsia al perro, sacando las caderas. Cabeza de fémur junto con el acetábulo.

Realizamos un estudio radiológico, macroscópico y microscópico de las muestras obtenidas.
Este estudio lo realizamos a los 18 meses de haber trasplantado las células madre mesenquimales.

Cuando valoramos las muestras anatómicas, en las cabezas de fémur podemos ver perfectamente definidas dos líneas de trabajo de las células madre, la zona donde el rozamiento es constante donde la cabeza de fémur actúa con el acetábulo, en todos los movimientos de función. Tenemos una superficie lisa, pulida, y brillante, superficie exquisitamente trabajada y superficie totalmente funcional sin asperezas ni defectos que pudieran inducir a trastornos osteoartrosicos.
Y una segunda superficie más grosera y menos lisa, con un magma de material que esta como depositado sin organizar.

En el acetábulo vemos lo mismo, una superficie definida, lisa, de fricción perfecta y con una estructura brillante y de deslizamiento correcto, y alrededor lo mismo una sobre baba, exagerada con desorganización, de estructura grosera y marchando hacia la periferia.

Microscópicamente se observan formaciones de condrocitos en columnas, formando un tejido de cartílago estructurado, y proporcionando una superficie preparada para el deslizamiento de la articulación, y para soportar la presión de la marcha y de la función.

En los cortes anatómicos macroscópicos antes del estudio microscópico, se aprecia de una forma muy definida lo que hemos comentado antes, las dos líneas de trabajo de las células madre. La zona de trabajo articular, y la zona de superficie no funcional.

Acetábulo 1 Acetábulo 2

Acetábulo 3

Cabeza fémur 1 Cabeza fémur 2

Cabeza fémur 3 Cabeza fémur 4

Cabeza fémur 5 Cabeza fémur 6

Cabeza fémur 7

SF1 SF2-1

SF2-2 SF-2-3

SF2-4 SF2-5

SF3-1 SF3

SF4-3 SF4-5

SF4-6 SF4-7

SF4-9 SF4-10

SF4-11 SF5-1

SF5-2 SF5-3

SF5-3 SF5-4

SF5-5 SF6-1

SF6-2 SF6-3

SF6-5 SF7-1

SF7-2 SF7-3

SF HUESO NORMAL-1 SF7-4

Cabeza de fémur 1
En la zona de la imagen de la izquierda y abajo, es una zona d de periostio normal del hueso.
Zona central de color amarillo parecido al periostio
La imagen derecha arriba amarillenta redonda podría ser forage.

Cabeza de fémur 2
Tejido amarillento que aparece en la zona superior izquierda es un tejido extraño, no normal es el tejido que ocupa un espacio vacío. Es un tejido sin diferenciar, formado por una matriz de colágeno, colagenica, en el cual se aprecia una diferenciación condroide incipiente como veremos en las muestras microscópicas.
Al mismo tiempo aparece un fenómeno de calcificación desordenado y amorfo
(No sabemos si las zonas donde este tejido se calcifica, son zonas de apoyo o no, si son zonas muertas sin plasticidad, ni necesidad de rozamiento).

Tejido de relleno, enyesado
No sigue ninguna especificidad, es una ¿restitución?, de forma amorfa grosera (a lo bestia)
Neoformado, como sustitución, o REMODELACIÓN.

Acetábulo 2
Imagen superior izquierda, forma circular amarillo, se corresponde al orificio del forage. Al inyectar las células madre, en el pocillo que hay se depositan y trabajan.

La arquitectura ósea es anárquica sin patrón estructural.
En la zona de la derecha el tejido que esta entre el 8-9, es un tejido de color amarillo con cierto orden.
- Tejido propio de cartílago.
- Línea de cartílago articular propia.
- Se calcifica y se osifica.

SF 5-2
El corte se corresponde al macro acetábulo -2 la zona 6.
Depósitos de calcio y colágeno, tejidos colágenos amorfos, aparecen tejidos de calcificación.

SF 5-3
En la imagen en la parte inferior izquierda, aparece un proceso de trabeculado normal, con contenido hematopoyético (medula ósea) NORMAL
La parte superior de la imagen, tejido de relleno, imagen de color rosa. La matriz es de colágeno, vascularizado, pero muy anárquico.

SF 5-4
Si dividimos la imagen en dos, tenemos en la parte superior el tejido de formación nueva. Y en la parte inferior normal con el componente hematopoyético.

SF 5-5
Corresponde al macro acetábulo 2. Zona 6 pegado al tejido amarillo.
Fondo de colágeno anárquico, pero empiezan a aparecer una ordenación de tipo condroide, aparición de condrocitos (puntitos blancos con un puntito negro).
Metaplasia condroide?
Diferenciación?
Sin arquitectura histológica definida.

SF 6-1
Macro acetábulo -2 entre el 8-9 parte superior.
En esta imagen dividida, por una línea con forma de ECG, aparecen dos tejidos superpuestos.
En la parte superior, condromas en matriz cartilaginosa típica.
TEJIDO CARILAGINOSO NORMAL, estructuras de condromas, con condrocitos dispuestos en columnas, y líneas.
En la parte inferior tejido en desorden (parece que sea un tejido o estructuras sometidas a estrés.

SF 6-2
Vemos la línea de transición en la parte superior izquierda.
Transición entre el tejido superficial y el tejido óseo trabecular.
En macro el tejido de la parte superior izquierda seria el tejido amarillo, el tejido nuevo el de restitución.
En la parte inferior, un tejido cartilaginoso totalmente estructurado arquitectónicamente, y con un patrón de osteomas alineados. TEJIDO NORMAL.

SF 6-4
Las imágenes de la derecha superior podrían ser células madre trabajando diferenciándose, clonándose, especificándose
Por la parte inferior tenemos una estructura con condromas normal.

SF 6-5
Lo mismo con más detalle
La imagen más azul de la parte superior derecha en forma de línea gruesa es calcio. Tejido calcificado.
La matriz de colágeno se calcifica directamente; (¿Por qué? Es que no necesita otra estructura porque no apoya, no roza, no se desliza, no sufre cargas) .
Las células grandes, posiblemente las células madre se van transformando en tejido cartilaginoso, a partir de la formación de condrocitos que se unen en condromas.

SF 7-1
Corresponde al macro en acetábulo 2 en la posición 10.
Tejido de colágeno desorganizado basto, sin indicios de tejido hematopoyético.

SF 7-2
Se empiezan a ver condrocitos, el tejido empieza a diferenciarse y especializarse.

SF 7-4
Macro acetábulo -2 zona 9 ½-10
Si dividimos la imagen micro con una diagonal desde el vértice inferior izquierdo al borde superior derecho tenemos:
- En la parte superior, tejido de relleno, restitución, basto amorfo sin estructura tejido de colágeno, en el que podemos visualizar algunos condrocitos empezándose a diferenciar.
- En la parte inferior, tejido óseo normal, trabeculado y con tejido hematopoyético.
La última imagen es tejido normal.

Cabeza de fémur 1
Es una estructura bastante heterogénea en cuanto a coloración. Las zonas oscuras son las estructuras óseas normales. Las zonas amarillentas, son lo que hemos definido como tejido de relleno, tejido de restitución-sustitución.

Micro SF1-1
Foco amarillento, se corresponde al foco de la izquierda dentro del hueso, la parte amarillenta.
Se está creando o formando:
- Una matriz colagenica densa muy homogénea, no trabecular. Desorganizada, sin seguir orden. Coloreada de rosa.
- Aparecen grandes huecos de tejido adiposo.
- Pequeños orificios con núcleo de color blanco corresponden a los condrocitos.
No tenemos ninguna estructura, y no se sigue ningún orden.

SF2-1
ESTAS IMÁGENES DE LA 1-5 SON LO MISMO.
Corresponden en el macro al número 9 parte superior.
Focos blanquecinos.
- Matriz colagenica con huecos de tejido adiposo, con presencia de tejido hematopoyetico, medula ósea
- Aparecen focos blancos, y zonas de un color mas azulado, estas zonas son zonas en proceso de calcificación.
- Líneas paralelas (forma de rodajas de cebolla), se corresponden a formas de tejido calcificado, escalonadamente, estratificado,
(Podríamos presuponer que existe una sedimentación de estas capas a consecuencia de estrés, o fuerzas de compresión en estas zonas debidas a los movimientos normales de la articulación).
Encontramos formas de condrocitos. (Intento de organización).

SF2-2
En la imagen macro se corresponde ala V en este tejido que hablamos.
En la mitad de la derecha zona de tejido anormal y debajo no hay tejido hematopoyético.
En la mitad de al izquierda hay tejido hematopoyético medula osea, pero no hay tejido trabecular.

SF2-3
Misma zona macro que la SF2-1
Se ven perfectamente bien los condrocitos.
PLASTICIDAD, la cabeza del fémur se va remodelando y todos los cambios están más evidentes. Se aprecian intentos de osificación, pasando por la fase de calcificación en bandas y en estadios posteriores. En el acetábulo no se veían. (Se corresponde a las zonas más amarillentas más blanquecinas).

SF2-4
Imagen con menos aumentos vemos perfectamente las líneas (cebolla).
Tejido colagenico sin organizar nada de trabeculado óseo.

SF2-5
Si comparamos con el acetábulo la coloración es más rosa.
Si miramos la imagen en el cuadrante superior izquierdo, tenemos una tonalidad más azulada esto es calcificaron de la matriz colagénica con condrocitos sueltos.

SF3-1
En el macro se corresponde al SF-1, nº 3 de la regla, tejido amarillento, de neoformación exuberante, líneas blanquecinas.
En el micro:
En el cuadrante superior de la derecha tejido óseo esponjoso normal (artefactos), tejido hematopoyético que se corresponde a la medula ósea.
Superior izquierda e inferior izquierda y derecha:
- Color rosa es la base tejido colagénico
- Líneas bandas cráteres más azuladas zonas de calcificación dispersa o líneas de sedimento (estratificado, presión estrés, acondicionamiento).
Tejido amorfo, con calcificaciones de la matriz colagénica y condrocitos.

SF3-3
Cuadrantes superiores 1-2 tejido adiposo, hematopoyético, y medula ósea.
Cuadrantes inferiores 3-4matriz colagénica con condrocitos
Zonas azules de calcificación.

SF4-3
Macro se corresponde al nº 9.
En la imagen micro aparee una matriz amorfa colagénica, con colores mucho más heterogéneos, y líneas muy marcadas
En la zona derecha e izquierda más calcificaciones y en el centro inferior también.
Hay un mayor número de condrocitos, intento de organización.

SF4-5 (mejor imagen)
Estas zonas de calcificaron de la matriz colagénica, en el acetábulo no se veían.

SF4-7
Intento de formar líneas organizadas, calcificaciones (presión, estrés, fuerza…).

SF4-9
Concentración de condrocitos, algunos ya con dos núcleos, similares a condromas, organización.

SF4-11
Ampliación del 9.
Tejido cartilaginoso un poco más maduro.
Conclusiones:
Matriz colagénica, con diferenciación condroide incipiente
Es más evidente en la cabeza femoral que en el acetábulo, fenómenos y fases de calcificación.
En ocasiones vemos líneas de depósitos de calcio disponiéndose con cierto sentido (cráteres, corte de cebolla).
Podemos poner el símil de una pared con agujeros y desconchada. Sería el aspecto del cartílago OA, e histológicamente encontramos un desastre con un tejido mesenquimal que intenta parecerse o hacer de cartílago (Frankenstein) TEJIDO A LO BESTIA, sin ningún orden histológico. (3)

Tercer caso Golden hembra, nacida 03-01-2004. Artrosis bilateral de cadera, posible displasia. Perro con un grave problema de piel y un hipotiroidismo. Presento también artrosis de codos.

A los 6-7 meses el animal sufre una luxación de la cabeza femoral izquierda, le diagnosticaron displasia de cadera.

14-07-2009- se diagnostica una osteoartrosis de cadera grave. El perro prácticamente no puede andar más de 10minutos. Dolor a la manipulación, pérdida de masa muscular, y déficits de propiocepción muy manifiestos. Le cuesta levantarse, y no quiere andar.

Proponemos una artroscopia, para realizar una limpieza articular, aplicación de factores de crecimiento.

En la radiografía observamos:
- Poca congruencia articular.
- No se aprecia la línea interarticular.
- Osteofitos intraarticulares.
- Articulaciones muy colapsadas.
- Peor la izquierda que la derecha.

- Sinovitis
- Articulación muy colapsada
- No se aprecia una congruencia buena
- Muchos osteofitos
- capsula muy engrosada

Sinevectomia
Aspiración forzada
Forage bilateral
Aplicación de factores de crecimiento.

Sinovitis inflamatoria. Fibrosis. Defectos condrales muy marcados. Perdida de cartílago.
En la imagen 4 vemos la broca realizando el forage.

22-08-2009: No quiere andar mucho dolor todavía. Aplicación de factores de crecimiento tres aplicaciones después de la artroscopia.

05-09-2009: En la EPI extremidad posterior izquierda, presenta una paresia con dolor. En el estudio radiológico, vemos un disco espondilosis en la L5-L6, analíticamente leucocitosis y una forma inflamatoria muy marcada. Responde bien al tratamiento con corticos
Se recupera, y empieza a responder al tratamiento, sigue con aines, y en ocasiones analgésicos.

10-05-2010: Revisión caderas, presenta molestias a la extensión y flexión, la congruencia articular es buena, pero deberíamos repetir PRGF factores de crecimiento.

08-06-2011: Se propone a Lluna entrar en un programa, de trasplante de CELULAS MADRE MESENQUIMALES.

15-06-2011: Se realiza una artroscopia en las caderas, a fin de limpiar perfectamente las articulaciones, y preparar el lecho para la aplicación de células madre mesenquimales. La obtención de la grasa y de la sangre se realiza mediante un protocolo establecido.

23-06-2011: Aplicación por artrocentesis de las células madres más factores de crecimiento.

Radiografía:
Mala congruencia articular
No hay línea interarticular definida
Articulación osteoartrosica con defectos condrales y osteofitos.
Articulación muy colapsada.

Funcionalidad:
Hay dolor en la marcha.
Cojea ostensiblemente.
Le cuesta levantarse.
Movimientos flexión extensión restringidos y dolorosos.

No hay dolor mejor flexión y extensión, no hay demasiados cambios radiológicos, pero sí que se intuye movimiento a nivel de congruencias.

Radiografía:
Se ve una buena congruencia articular.
No hay línea interarticular definida.
Se ven las lesiones condrales, no hay osteofitos.
Articulación limpia.

Funcionalidad:
Anda sin dolor, quiere moverse.
Ligera cojeara funcional.
Se levanta sin problemas.
Movimientos flexión extensión, no dolorosos, ha aumentado el rango.

No hay dolor ha aumentado considerablemente el rango de flexión extensión, y a nivel de estudio radiológico, ya apreciamos remodelación, plastia de forma en la congruencia, recogiendo el acetábulo la cabeza femoral.

Radiografía:
Muy buena congruencia articular.
Línea interarticular definida.
Alisamiento de las zonas con lesiones condrales buena superficie.
Articulación limpia.

Funcionalidad:
No hay dolor.
Corre juega y actúa con el juego buscándolo.
Baja y sube del coche sola.
Sube baja se levanta con facilidad.
Movimientos de flexión extensión dentro de los rangos normales, hay que tener en cuenta la hipertrofia de las capsulas articulares.
La articulación presenta una estructura muy buena.
La satisfacción del propietario es muy buena.

Congruencia perfecta.
No hay dolor a la manipulación.
Aumento de la flexión extensión y remodelación total de la articulación.

Radiografía:
Congruencia perfecta.
Línea interarticular definida.
Radiológicamente la articulación esta biomecánicamente perfecta.
No se aprecian defectos condrales.
Articulación limpia, sin ningún elemento extraño.

Funcionalidad:
La funcionalidad es perfecta.
Juega corre actúa con otros perros.
Ha cambiado el carácter esta ALEGRE.
Los movimientos son correctos SIN DOLOR.

Aprovechando que se le ha extirpado un quiste cutáneo se aprovecha para realizar un estudio de las caderas, revisión caderas; buena congruencia articular. Limpieza total articular. Persiste la remodelación articular.
En este periodo de tiempo ha sido operada de piometra y ha tenido dos episodios de columna.
El animal está totalmente funcional y en condiciones óptimas funcionales.

Las caderas, tanto en el estudio radiográfico, como en valoración de función, están perfectas.

04-11-2016: Eutanasia. Han empeorado mucho los problemas de columna (cauda), y se ha complicado con una insuficiencia renal.

Caderas:
Las articulaciones están perfectas, las superficies articulares presentan una superficie lisa continua, sin ningún defecto condral, siendo el interior de la bóveda en las caderas correcto, acetábulo cabeza femoral con un deslizamiento normal.
Y una funcionalidad perfecta.

La manipulación en las caderas es total en movimientos de flexión extensión y abducción adduccion, presenta un buen volumen de masa muscular.
Las muestras anatómicas estudiadas, presentan una restructuración anatómica normal y perfecta.

Las cabezas de fémur están totalmente redondeadas esferoidales, con un grueso de cartílago importante, y con una superficie lisa homogénea y deslizante.
El acetábulo presenta un tejido de absorción que rodea la articulación y favorece el deslizamiento, y amortiguan los golpes.

Las cabezas femorales están remodeladas, cubiertas por cartílago, lisas y perfectamente congruentes.
En el acetábulo, se encuentra rodeado y lleno de un tejido de confort, que absorbe la cabeza femoral, y la incluye dentro de la articulación. La superficie del acetábulo, esta lisa homogénea y deslizante, haciendo que la funcionalidad de la articulación sea correcta.

Esta situación se da tanto en la articulación izquierda como en la derecha. No hay ligamento redondo en ninguna de las dos.
En ambos casos el acetábulo está lleno de este tejido de confort que ayuda a mantener perfectamente la articulación compensada, deslizante y funcional.

Si analizamos las radiografías de las muestras anatómicas, apreciamos perfectamente cuál ha sido el trabajo realizado por las células madre, se visualiza la articulación en su estado de deterioro, y se puede ver perfectamente, las zonas que han sido rellenadas recubiertas y biorregeneradas.

El aspecto de la articulación macroscópica, presenta una imagen de articulación joven. De un animal joven, un animal que todavía está creciendo, el aspecto del cartílago es un cartílago en crecimiento hialino, color blanco rosado, sin ninguna impureza, sin artefactos, ni marcas de cansancio o desgaste.

Fuera de la superficie de contacto, hay un material sobrante que a medida que se aleja va siendo más grosero y menos consistente, que va formando una aureola periarticular interna, que en definitiva hace de tope y de amortiguador de impactos sobre la articulación. A esta imagen la llamaremos Nido de Cigüeña, por su parecido al nido que conforman estas aves.

Histológicamente, tenemos un tejido exactamente igual al cartílago, condrocitos alineados en columna, y evolucionando. En el hueso, tenemos médula ósea, regenerándose y evolucionando. La estructura es idéntica a una articulación sana.

Las superficies articulares se encuentran revestidas por una gruesa membrana cartilaginosa. Esta membrana se diferencian dos zonas de cartílago por su morfología y función.

Externamente y en contacto con el medio externo, el tejido neoformado corresponde a un modelo de cartílago hialino propiamente dicho.
Internamente en contacto con los sistemas fundamentales , se presenta una banda de tejido cartilaginoso endocondral.
El cartílago hialino propiamente dicho , tiene tanto en M.O. como en M.E., una estructura clásica formada por dos componentes, las condronas y la matriz cartilaginosa.

Las condronas se forman por condrocitos encerrados por una cavidad cartilaginosa , lo condroplastos que se rodean a su vez por un halo fibroso conocido con el nombre de territorio.
Los condrocitos se asocian en la condrona , formando los grupos isogénicos , y suelen ser escasos de 2 0 3, hasta 10 o 12, en el caso de cartílago joven o seudohipertrofico, os condrocitos aumentan en numero y pueden llegar hasta 30. Morfológicamente al M.O. son de forma esférica a ovoide, con núcleo central y citoplasma claro, en tanto que al M.E., son células con nucleo denso a los electrones, y en su citoplasma se destacan sustancias metabólicas como glucógeno y grasas, aunque pueden presentar gran desarrollo de su retículo endoplásmico rugoso.

La actividad del condrocito tiene relación con las prolongaciones citoplasmaticas , que existen en el condroplasto.

El condroplasto se forma por un halo de mucopolisaridos claros y homogéneos que se relaciona con la banda fibrosa y un espacio claro donde se aprecian las prolongaciones celulares.

La banda que forma la condrona, se forma por dos componentes , por una parte una gruesa capa de fibras de colágeno y como componente amorfo el condroitin sulfurico. Las fibras de colágeno en las condronas jóvenes o inmaduras , se les aprecia sus estrías transversales, en tanto que al madurar la condrona, el acido condroitín embebe a las fibras de colágeno y este es el motivo que por su parte no se les aprecie sus estrías, y por otra muestren una fuerte basofilia al M.O.

La matriz cartilaginosa, también denominadas interterritorios, es la sustancia mas basofila del organismo, y esta formada por fibras de colágeno y condroitín sulfúrico. Como ocurre con los territorios, en los cartílagos jóvenes o con problemas de maduración, las fibras de colágeno muestran claramente sus estrías, y cuando madura, la morfología de sus fibras se enmascaran al ser embebidas por el condroitín.

En las articulaciones estudiadas, en las superficies articulares se ha producido cartílago. Externamente es cartílago hialino, sin presentar terminaciones nerviosas ni vasos sanguíneos. Internamente es cartílago endocondral, que se relaciona con los sistemas fundamentales y forman laminillas óseas. (4)

En todos los casos estudiados, observamos dos características muy notorias.
En las cabezas de fémur hay un trabajo de recubrimiento total de la superficie de contacto, a fin de neoformar restructurar y convertir en una superficie lisa y esférica toda la cabeza femoral, a fin de conseguir una funcionalidad muy buena, y un deslizamiento fácil y no agresivo.
En el acetábulo en los tres casos estudiados, teniendo en cuenta que el tiempo de actuación de las células madre es muy dispar, se observa una estructura similar. Alisamiento y recubrimiento de la superficie de contacto con la superficie de deslizamiento del fémur, y la aparición de un tejido exuberante que incluye y absorbe la cabeza femoral, produciéndose una zona de confort y/o una zona de constricción no rígida de la cabeza femoral.

Este conjunto hace que el acetábulo cree una bóveda semielastica, donde la cabeza de fémur se mueve gira y se desplaza por rozamiento no agresivo, dentro de una zona fácil segura y biomecánicamente funcional. Hay que tener en cuenta que en los tres casos no existe el ligamento redondo. La cabeza de fémur no está sujeta al acetábulo, la capsula articular es la que mantiene la unión acetábulo cabeza femoral, este posiblemente es el motivo por el cual encontramos en el acetábulo este tejido exuberante, tejido de confort que incluye a la cabeza femoral, sujetando y al mismo tiempo amortiguando los impactos que recibe en el desplazamiento y en la función normal.

En la bibliografía lamentablemente, no hemos encontrado seguimiento a más de 6 meses de trasplante de células madre en patologías articulares en el perro.
Citaremos algunos autores que nos han servido para contrastar datos estadísticos (5,6,7,8).

1- Dra. Victoria Moreno. Directora de “FactorStem S.L.” Investigadora del “Centro Investigación Príncipe Felipe” de Valencia.

4- Dr. Jose Blanco. Catedrático Emérito de Histología y Anatomía Patológica de la Facultad de Veterinaria de Córdoba.

5- Tesis Doctoral Dra. Carmen Soler i Canet sobre “Análisis Macroscopico, Histológico e Inmunohistoquimico del Efecto del Plasma Rico en Plaquetas Autólogo en la Reparación de Defectos Condrales en conejo. Estudio Experimental”.

6- Tesis Doctoral Dr. Iván Serra Aguado sobre “Análisis Biomecánico e Histológico del Tejido de Reparación en Defectos Condrales de Espesor Completo tras la Aplicación de Plasma Rico en Plaquetas Autólogo. Estudio experimental”.

8- En veterinaria en artrosis y osteoartrosis (Black et al. 2009, Villar 2013) y en osteonecrosis cabeza femoral (Hang et al, 2012).